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评估的稻瘟病菌孢子交配型基因

发布日期：2012/9/28 10:14:39 阅读次数：1228次

分离丝状真菌聚合酶链反应分析通常是费时，涉及使用有毒化学物质如酚/氯仿。在酿酒酵母，聚合酶链反应检测可以用酵母殖民地（赫胥黎等人。图1990 6:236）。在这里，我们描述了协议，利用稻瘟病菌分生孢子直接分析没有提取脱氧核糖核酸。

聚合酶链反应法是以分生孢子生产燕麦文化（Craw ford等人。1986遗传学，114:1111-1129）已生长在室温下一周。收集分生孢子，5毫升无菌水加至每0.5毫升微管。一个平头牙签浸湿在无菌水和用来轻轻刮从分生孢子表面的文化与两岸的牙签。应注意避免传输介质从琼脂可能抑制反应。分生孢子被释放旋转牙签简要的水在微管。样品被冻结在液氮或在- 80℃冰箱10分钟。

对稻瘟病菌，10（4）- 10（6）孢子每反应得到的结果。太多的孢子（超过10（6））将抑制反应。聚合酶链反应进行添加到每个管分生孢子45毫升的10毫米的Tris - HCl（9在25℃）载有50毫米氯化钾，氯化镁0.1曲通X - 100，2.5毫米，0.2毫米1毫米每核苷酸，每个引物，1.25个单位的脱氧核糖核酸酶（试剂）。样本覆盖50的矿物油和受到以下反应条件：95℃5分钟；30个周期为95℃1分钟/ 52℃2分钟/ 72℃2分钟；其次是72 - 5分钟。

引物用于稻瘟病菌是Al（agcctcatcaacggcaa）和第5条（gtagcgtacaagcacgg）为mat1-1，块（ctcaatctccgtagtag）和（catccgatatgacgaca）为mat1-2。预期的产物是372个基点为376 mat1-1和英国mat1-2（礼貌博士seochang康）。对其他真菌，18引物检测和NS 2（白等人。，1989。聚合酶链反应议定书，学术出版社）中使用了孢子的聚合酶链反应试验。

这种孢子反应议定书允许快速测定的交配型（mat1-1和mat1-2）稻瘟病菌。这是特别有用的得分交配型在低生育或不育是一个问题的交叉或分析方面的收藏。交配型等位基因所确定的聚合酶链反应是一致的孢子交配试验58子代之间的一个交叉株4375-r-26×4136-4-3。真菌菌丝体可以用来代替孢子，但它可能更难以收集菌丝比孢子从培养皿文化不接触琼脂。

相同的协议已被成功地用于与粗糙脉孢菌，串珠镰刀菌和构巢曲霉与18基因引物检测和控制。这种孢子反应议定书可以适用于其他真菌和可能是有用的快速检测不准备在分析转化和外地收藏。

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