脱氧核糖核酸消化提取小鼠尾部

五削减约5毫米的老鼠尾巴，在离心管中一点六毫升冰（很冷，尾巴是不会坚持以聚四氟乙烯杵）

五同质化的尾巴与无菌铁氟龙杵彻底

五添加100ul（或200ul）batteys消化缓冲区（0.1氯化钠，蔗糖0.01米0.2时，乙二胺四乙酸，0.03m三，PH值8，和0.4 - 1 %十二烷基硫酸钠）

五添加以5 ul（或10ul）蛋白酶K（20 mg /毫升股票）

五酝酿在55？一小时，每一分钟旋涡

五添加17.5ul（或35ul）的8.0m醋酸钾，由涡流，孵化冰上一小时。

五孵化后，下自旋在寒冷的房间（“十四K转5分钟）和仔细除去上清液和转移到一个新的管。

*做以下步骤在通风橱！！！！！*

添加1卷和1卷酚氯仿，涡和自旋@十四K转5

带上相，转移到一个新的管，加1volume氯仿，涡和自旋@十四K转5

转移到新的管上清

添加2.5卷冰箱冷100%乙醇（弹管手指得到脱氧核糖核酸沉淀）

自旋@十四K转20分钟的冷室（@ 4？三），弃上清液小心地（不去除颗粒！！）

冲洗球团2.5.volumes冰箱冷70%乙醇（手指轻弹和自旋向下，在寒冷的房间丢弃上清液）

让15-20min颗粒风干

添加30-60ul无菌水（或缓冲区）化解脱氧核糖核酸（移液管上下溶解脱氧核糖核酸）。

项目需要：

消化缓冲区：（0.1氯化钠，蔗糖0.01米0.2时，乙二胺四乙酸，0.03m三，PH值8，和0.4 - 1 %十二烷基硫酸钠）

蛋白酶K：20毫克/毫升股票

苯酚

氯仿

8醋酸钾

100%乙醇（储存在- 20摄氏°冰箱）

70%乙醇（储存在- 20摄氏°冰箱）

无菌水（或缓冲区）

聚合酶链反应的密切基因：参考krausa等人，组织抗原1995：45，223-231。

1）聚合酶链反应扩增产物的813bp。

铝# 37：建CGI引物胃炎瘤影像中心

引物铝#沃：在中心的多伦多中心燃气轮机

制备：量化的外径阅读和准备为μg / 10ul反应。

1种反应：50ul

10倍的缓冲区，以5 ul

核苷酸的4ul

氯化镁4ul

2.5ul每个引物

taqpol 0.5ul

水21.5ul

基因在10ul水产品

库存解决方案：

10缓冲区：670毫米三基地166mm PH值8.8，硫酸铵，1%吐温20

核苷酸：体积/体积每个核苷酸的10毫米。*后的结论是200um每聚合酶链反应。

氯化镁：股票25毫米

引物：股票20um

聚合酶链反应周期：程序# 139 c209d。

1cycle：94°丙3 min

5cycles：96°丙25sec

70°- 45秒

72°三年

21cycles 96°丙25sec

65°- 45秒

72°三年

4cycles 96°丙25sec

55°丙1

72°丙2分钟

1cycle 72°℃10 min

1cycle 4°-永远

经营的产品10ul 1%琼脂糖凝胶。

2）巢式聚合酶链反应扩增产物是：715。

铝#底漆22：股市太极拳抗胸腺细胞球蛋白的达公车特

引物铝#问：骨巨细胞瘤骨巨细胞瘤化学计算集团共同国家评估反恐法

制备：使1 : 100稀释的反应（例如以5 ul反应产物为495ul水）。添加到混合以5 ul巢式聚合酶链反应。

1种反应：50ul

10倍的缓冲区，以5 ul

核苷酸的4ul

氯化镁4ul

2.5ul每个引物

taqpol 0.5ul

水26.5ul

脱氧核糖核酸以5 ul以前的1 / 100反应

库存解决方案：

10缓冲区：670毫米三基地166mm PH值8.8，硫酸铵，1%吐温20

核苷酸：体积/体积每个核苷酸的10毫米。*后的结论是200um每聚合酶链反应。

氯化镁：股票25毫米

引物：股票20um

聚合酶链反应周期：程序# 134 c209d。

1cycle：94°丙3 min

30cycles 94°- 45秒

55°- 45秒

72°丙2分钟

1cycle 4°-永远

经营的产品10ul 1%琼脂糖凝胶。

聚合酶链反应的看家基因G3 PDH：参考试剂

引物5 ＇：行政协调会抗体型猫海合会空管交流

引物3 ＇：太极拳的行政协调会协调的酶的助教

制备：量化的外径阅读和准备为μg / 10ul反应。可以使用更少的基因多达100 ng。

1种反应：50ul

10倍的缓冲区，以5 ul

核苷酸的4ul

氯化镁4ul

2.5ul每个引物

taqpol 0.5ul

水21.5ul

基因在10ul水产品以100 ng

库存解决方案：

10缓冲区：扩增标准反应缓冲瓦特/氯化镁应使用。

核苷酸：体积/体积每个核苷酸的10毫米。*后的结论是200um每聚合酶链反应。

氯化镁：股票25毫米

引物：股票20um

聚合酶链反应周期：程序# 134 c209d。

1cycle：94°丙3 min

30cycles 94°- 45秒

60°- 45秒

72°丙2分钟

1cycle 4°-永远

经营的产品10ul 1%琼脂糖凝胶。