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当前位置：上海劲马实验设备有限公司 > 技术文章 > 牛腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)ELISA试剂盒使用说明书
发布日期：2023/7/4 15:44:48 阅读次数：2472次
本试剂盒仅供研究使用。
48T
使用目的：
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过che底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中牛腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)的存在与否。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为腺病毒3型抗体(BAV-3 Ab)阳性。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
原创作者：上海劲马实验设备有限公司
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