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小心！蛋白提取也是需要注意的

发布日期：2019/5/15 10:47:26 阅读次数：2459次

做科研的，难免不了的连夜做实验，写论文......其实这些对实验者来说根本算不了什么？或者来说他们也许早就适应了这样的日常。只是好多小细节不注意，可能让他们一夜回到解放前。不仅浪费了精力去做这个实验，而且也花了代价去购买这些试剂，所以说，好多细节是需要我们注意的。

那么下面问题就来了：

1.如何提取细胞蛋白样品？

2.离心后上清出现白色粘稠的东西，很容易被吸上来，如何避免产生这种白色的东西?

3.吸到这种白色的东西，对WB结果有什么影响？

经过长期努力，我们找到以下答案：

1. 如何提取细胞蛋白样品？

冰上裂解30min，期间涡旋振荡一两次以充分裂解（冰盒或者任何装有冰的容器，在摇床上震荡）

2.离心后上清出现白色粘稠的东西，很容易被吸上来，如何避免产生这种白色的东西?

白色的应该是分离开的核酸，这个是无法避免的，本来就是想把蛋白和核酸区分开。可以尝试使用超声破碎几次

3.吸到这种白色的东西，对WB结果有什么影响？

影响蛋白定量。如果目的蛋白是核蛋白，结果可能不好

但是我们也有相关事项需注意注意：

白色粘稠物质是细胞裂解不充分造成的，粘稠是染色质打开造成的，这是RIPA裂解提取蛋白通常都会遇到的，离心上清和沉淀会出现难分离的情况，现在有一种柱式法蛋白提取方法，可以很好的解决裂解之后粘稠的问题，不会出现不容组分，提取样品总蛋白核酸物质挂在柱子上，蛋白溶液在收集管中。裂解细胞，过柱子，收集管里就是所需要的蛋白。组织样品也一样简单操作5分钟即可获得总蛋白。无需担心样品粘稠，无需焦虑分离上清时沉淀的干扰。

原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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