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特别关注:elisa样品稀释注意事项

发布日期：2018/3/29 11:18:43 阅读次数：1932次

elisa试剂盒平衡中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃)，一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短， elisa反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。

样品和试剂的混匀稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。

elisa反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。

一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。

elisa常用的几种方法

一、双抗体夹心法测定抗原

将抗原免疫种动物获得的抗体吸附于固相表面;

加抗原，形成抗原-抗体复合物;

加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;

加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);

加底物。底物的降解量＝抗原量。

二、直接法测定抗原

将抗原吸附在载体表面；

加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；

加底物。底物的降解量＝抗原量。

三、间接法测定抗体

将抗原吸附于固相载体表面；

加抗体, 形成抗原-抗体复合物；

加酶标抗体；

加底物。测定底物的降解量＝抗体量。

产品问题解答
我能否使用自己的稀释液或者缓冲液？
◆ 每个试剂盒中都含有按配方配制的与特异性样品种属相配套的稀释液，以确保待检测的样品
被正确稀释。具体请参看说明书。
建议
◆ 确定待检测的样品在收集和制备时保证无菌操作。
◆ 如果要检测多个样品，将样品隔离并标记清楚以防相互污染。
◆ 检测前，将样品离心除去颗粒。将样品转移至新的离心管内，混合均匀。
◆ 在混合样品时，使用容积至少比样品体积大50%的离心管以保证混合充分。
我没有足量的稀释液去稀释所有的样品，怎么办？
◆ 试剂盒内提供说明书中所指定的足量的稀释液。能保证所有的标准品和样品检测两次。
◆ 如果没有推荐的稀释度，或者需要大量稀释，请在实验前计算出所需的稀释液总量，然后联
系技术服务部门获取额外的稀释液。
我能否使用试剂盒内非推荐的样品类型？
◆ 试剂盒内说明书中所指定的样品类型是经过验证可行的。其它未推荐的样品类型是没有经过

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