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上海劲马为您介绍胎牛血清使用中的常见问题

发布日期:2016/11/29 9:23:36 阅读次数:2932次

上海劲马实验设备有限公司为您介绍胎牛血清使用中的常见问题:
一、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?
胎牛血清因为其产品的特性,在储存的时候需要多加注意,错误的操作会使胎牛血清失去活性,在实际应用的时候应注意以下几点:
在解冻和储存的时候应该将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
二、血清中包含絮状沉淀该怎么处理?
血清中沉淀物的出现有许多种原因,但*普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的原因。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。
若欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
三、如何避免血清中产生沉淀?按如下操作可避免沉淀的产生:
1、解冻胎牛血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。
2、解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
4、勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破
坏,从而影响血清的品质。
5、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
6、若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
四、培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
五、为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究,培养es细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

六、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
1、细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
2、血清质量不好,反复冻融的结果;
3、配制培养基的ph值偏高,不宜细胞生长;
4、配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
5、培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
七、细胞培养中如何防止黑点生成?
1、尽可能地减少血清冻融次数。
2、培养基无需37℃水浴。
3、培养基保持*佳ph值7.0- 7.2。
4、严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
5、掌握细胞传代的*佳时机,细胞切勿生长过老。
八、血清保存和使用须注意:
血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时?,应先将血清至于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
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原创作者:上海劲马实验设备有限公司

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