如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的
单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的
elisa试剂盒提高到新水平。
上海劲马在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
（三）间接法测抗体
间接法是检测抗体*常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。ELISA试剂盒操作步骤如下：
（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，ELISA试剂盒可用酶标羊抗人IgG抗体。
（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。
用户选用试剂盒，主要是为了及时得到可靠的数据。因此，试剂盒实用性是用户选购试剂盒的考虑。从实用的角度来看，劲马牌试剂盒必须满足下述要求。
（1）质量可靠。在研发过程中选择权威测定方法，反复优化测定体系、测定条件和操作步骤，并且进行多种生物样品的实际测定验证，以确保测定的专一性、灵敏度、重复性和回收率；在生产过程中实行严格的质量控制，主要试剂选择国外知名生产商，并且从固定供应商处购买，生产人员经过系统长期培训，并且建立了严格的质量追溯体系。劲马生物实行先用后付方法，即用户满意后才付款。万一出现质量问题，劲马生物及时免费提供新试剂盒。
（2）操作简便快捷。首先，测定方法以分光光度法为主，并且可以用酶标仪测定，保证绝大多数用户都有相应的
仪器和操作经验。其次，保证测定结果可靠的基础上科学简化操作步骤，例如，根据反应步骤配制工作液，显著减少了用户加液次数，尽量统一加试剂的体积，显著减少用户调移液器的次数等等。*后，操作说明简洁明确，用户一看就懂。
（3）规格合理。试剂盒中通常由必须现用现配的试剂。如果保证过大，用户一天内不能用完，会造成试剂浪费。因此，常量法劲马牌试剂盒以50T/48S规格为主，绝大多数用户能够一天内用完。微量法大规格包装可以节省用户经费。因此，劲马牌试剂盒也有大包装试剂盒，其中需要现用现配的试剂，采用分装成几个试剂瓶的方法，方便用户分次使用。
（4）系列成套，便于用户选择。劲马生物紧跟研究热点，针对某个研究主题，优选测定指标，全面满足用户进行该主题研究的需要。
原创作者：上海劲马实验设备有限公司
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