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ELISA试剂盒各环节中常见问题及解决方法

发布日期：2023/2/7 15:30:01 阅读次数：2790次

ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。

将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。

下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法一、选择试剂

选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作将试剂在室温下平衡30-60分钟。

二、加样

可能原因：

1)血清或血浆标本分离不好即进行加样; 2)手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

解决办法：

1)ELISA试剂盒标本为血清：zui好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样，zui好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时，请分批操作。

三、孵育

可能原因：

1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底; 2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

解决办法：

1) 贴封片或加盖; 2) 按说明步骤严格控制操作时间。

四、洗板

可能原因：

1) 采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底;洗板针堵塞，抽吸不完全;洗板不畅，导致洗板效果差。3) 反应板过多造成洗板等待时间长。

解决办法：

1)ELISA试剂盒保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后zui好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; 2) 合理安排，或多用几台洗板机。

原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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