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定量PCR常见问题是否选定了合适的增益值

发布日期：2015/4/20 9:27:27 阅读次数：5615次

定量PCR常见问题是否选定了合适的增益值
定量PCR常见问题是否选定了合适的增益值这是一个普遍的问题，根据上海劲马生物做的一些市场了解，一些情况下会看到曲线超过了窗口范围，在荧光强度100的地方成一直线。尽管大部分的数据可以用，但是减少增益，一些原始数据就不会超出范围。有时，在个循环信号就跳出了窗口范围，这是由于增益选得太高，看起来像没有检测到数据。如果熔解曲线分析时，开始荧光就达到了100，则应当用低的增益重新运行，而不需要重新运行扩增反应，SYBRGreenI和FRET的样品可以在一定程度上反复使用。

广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：

1. 外参法+终产物分析　所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现假阴假阳结果，没有监测扩增效率，定量不准。

2. 内参法+终产物分析　所谓“内参法”是指样本与阳性参照在一个反应容器内反应。这种类型对样本进行质控监测，排除假阴结果，但是定量不准。

3. 外标法+过程监测　这种类型监测扩增效率，阳性样本定量准，但是无法排除假阴结果。

4. 内参法+过程监测　由于样本与阳性参照在一个容器内反应，用同样的Taq酶和反应参与物，存在竞争性抑制，起始模板量浓度高的反应会抑制起始模板量浓度低的反应，所以定量不准。

5. 外标法+过程监测+内对照　这种类型监测扩增效率，阳性样本定量准，同时排除假阴结果。这种类型是应该提倡的。　PCR过程的监测有多种检测模式。*常用的有三种检测模式，见下面检测模式的内容。
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原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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