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ELISA法评价肠道免疫功能

发布日期：2022/9/20 14:24:02 阅读次数：2873次

ELISA 法评价肠道免疫功能是通过检测不同炎症蛋白如急性期炎症蛋白 MPO，血清淀粉样蛋白 SAA 或细胞因子如 IL-6，IL-1b 等的表达水平。

器材：
组织匀浆器、酶标板、酶标仪。

试剂：
① 组织裂解液（200 mmol/L NaCl，5 mmol/L EDTA，10 mmol/L Tris，10% glycine，1 mmol/L PMSF，1 mg/ml Leupeptide，28 mg/ml aprotinin；pH7.4）;
② PBS 缓冲液;
③ BCA 蛋白浓度检测试剂。
④ ELISA 试剂盒

步骤
ELISA 法评价肠道免疫功能的基本过程可分为如下几步，以检测急性期炎症蛋白 MPO 为例：
A 取出目的肠道组织，在冰冷的 PBS 中纵向剪开，小心洗去腔内的消化液，在平板纸上吸去多余液体。
B 10 ml 圆底离心管中加入 1～2 ml 组织裂解液和漂洗后的肠组织，在冰浴状态下匀浆 30 。
C 冰上孵育 10 分钟，全部转移 1.5 ml EP 管中，4 ℃ 离心 15 分钟，转速 12000 r/min。
D 小心分离上清，使用 BCA 法测定蛋白浓度。
E 测定浓度后的上清分装后 - 80℃ 保存或冰上等待，立刻用于 ELISA 检测。
F 根据 ELISA 试剂盒配备的标准实验步骤进行 MPO 的水平检测。如下图所示

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原创作者：上海劲马实验设备有限公司

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